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一步法质粒大提试剂盒(10~100mL)图片
产品货号:
BTN71101
中文名称:
一步法质粒大提试剂盒(10~100mL)
英文名称:
One-Step Plasmid Maxi Kit(10-100mL)
产品规格:
5次
发货周期:
已停产
产品价格:
已停产
本试剂盒是在我司一步法质粒DNA提取试剂盒(BTN70903)基础上开发的、能够快速从100mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。

试剂盒特点:
  • 快速,整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟,比传统的碱变性方法快捷。
  • 超螺旋比例高,独创的非碱法一步式细菌裂解技术,避免了强碱对DNA的损害,得到的质粒DNA切口更少。
  • DNA纯度高,几乎没有基因组DNA和RNA污染,OD260/280一般在1.7~1.9之间。
  • DNA可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。
  • 最大吸附量为600μg DNA,具体产率取决于质粒拷贝数。
  • 过程简单,重复性和稳定性好。


试剂盒组成:
成分规格
溶液A70mL
大离心吸附柱5套
专用洗柱液50mL×2
DNA洗脱液2.010mL
说明书1份


保存条件:
常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。

使用方法:
  • 用50mL离心管分数次收集10~60mL新鲜的菌液,一般可以5000rpm
    离心10分钟,去除上清即得细菌沉淀。
  • 往细菌沉淀中加入14mL溶液A,充分振荡悬浮或吹打混匀。
    注意:充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
  • 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中,放入到配套的收集管中。
  • 6000rpm离心5~10分钟,弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA,而将基因组DNA和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液,可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。
  • 将10mL通用预洗液加入到离心吸附柱中,室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟,弃穿透液。
  • 重复上步一次。
  • 将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中,室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟,弃穿透液。
  • 重复上步一次。
  • 室温6000rpm空甩5分钟,弃穿透液。注意:此步很重要,不能跳过。
  • 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50mL塑料离心管中,加1mL通用洗脱液(洗脱液如加热到50~65℃效果更佳),室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟,收集液即是质粒DNA溶液。
  • 重复上步1次以便洗脱更多的质粒DNA。
  • 合并所得质粒DNA,立即使用或-20℃储存。


注意事项:
  • 细菌培养时间一般为12~16小时,但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
  • 菌体过多会造成裂解液粘稠透,需要充分吹打,否则容易堵塞离心柱。
  • 通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次,否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
  • 质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL过夜培养菌体可收获约10μg高拷贝质粒。
  • 从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为2~3条带有时甚至为4~6条带均属正常,它们就是还未来得及分开的相套的质粒,易被误判为基因组DNA。

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